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保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.Caspase-1底物短期4℃避光保存，长期-20℃避光保存；。
2.Caspase底物在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
2.Caspase底物在冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
有效期
一年
检测方法
荧光酶标仪 /荧光光度计
适用样本
纯化的重组酶 / 细胞 / 组织
仪器准备
1. 荧光酶标仪/荧光光度计
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
2. 离心机
3. 移液器
4. 冰箱
5. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
2. 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 荧光检测专用的黑色96孔板
使用注意事项
1. 如果样品中蛋白含量低，加大样品量，裂解样品时需设法使样品中的蛋白量达到200-500 ug每样。
2. 如果样品中激活的caspase水平很低，适当调节诱导细胞焦亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。
3. Caspase-1底物避光保存，使用过程中尽量避光。
2. 如果样品中激活的caspase水平很低，适当调节诱导细胞焦亡的时间，找一个caspase激活比较强的时间点进行检测。
3. Caspase-1底物避光保存，使用过程中尽量避光。
使用方法
电子版仅供参考，最终以试剂盒里的纸质说明书为准！
裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1 ml缓冲液中加入10 μl DTT。充分混匀置冰上备用。
样品处理
A． 细胞样品
1. 收集5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
B． 组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
Caspase-1活性检测
检测试剂加样比例：
酶活性计算
Caspase-1活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
裂解缓冲液和检测缓冲液配制
根据待测样品数准备裂解缓冲液和检测缓冲液，每1 ml缓冲液中加入10 μl DTT。充分混匀置冰上备用。
样品处理
A． 细胞样品
1. 收集5×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞中加入50 μl冷的裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
4. 置冰上持续振荡20-45分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上保存备用。
B． 组织样品
1. 取适量组织样本剪碎，按照每50 mg/100 μl冷的裂解缓冲液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体，冰上振荡20-45分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
3. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
蛋白定量
对上述处理过的上清进行蛋白定量。
Caspase-1活性检测
检测试剂加样比例：
酶活性计算
Caspase-1活性可表示为每百万细胞的相对荧光单位（RFU）、样品中每微克蛋白质的相对荧光单位（RFU），或处理组样品相对于未处理对照组或阴性对照样品的 RFU 倍数增加。
常见问题分析
荧光强度值偏低
caspase-1活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光强度值偏低，趋势不明显，无结果，无法显示与对照组细胞的差异等，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分：
4. 样品中激活的caspase-1水平偏低：
5. 检测时间点的选择是否合适：
6. 不适合本方法检测：
caspase-1活性检测方法常见的问题主要为测得的荧光强度值偏低，趋势不明显，无结果，无法显示与对照组细胞的差异等，其可能的原因主要集中在以下几个方面：
1. 样品上样量不够：
2. 样本不新鲜：
3. 样品裂解不够充分：
4. 样品中激活的caspase-1水平偏低：
5. 检测时间点的选择是否合适：
6. 不适合本方法检测：
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