2-8℃

1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！

一年

细胞

1. 离心机
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒

1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒

1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套

1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 在细胞沉淀中加入500-800 μl冷的提取液 A，涡旋振荡混匀或吹打混匀，置冰上振荡20-45分钟。
4. 在4℃，1200×g条件下离心5分钟。
5. 将上清（I）吸入另一预冷的干净离心管备用，沉淀用PBS重悬，然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟，弃上清。
6. 沉淀为细胞核。将沉淀用200 μl保存液B重悬后保存备用或直接用于下游实验。
7. 将上清（I）在4℃，6000×g条件下离心10分钟。
8. 沉淀即为线粒体。将沉淀用200 μl保存液B重悬后保存备用或直接用于下游实验。

1. 线粒体得率低？
可能是用提取液A处理时细胞没有裂解完全。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀，至无明显沉淀。

2. 提取后的线粒体和核具有活性吗？
本试剂盒不含有破坏结构的组份，细胞器均保持其天然结构和活性。

1. Shunshun Han et al.
Filamin C regulates skeletal muscle atrophy by stabilizing dishevelled-2 to inhibit autophagy and mitophagy
Molecular Therapy-Nucleic Acids 2022 （IF 10.183）

2. Changjie Lv et al.
Ivermectin inhibits DNA polymerase UL42 of pseudorabies virus entrance into the nucleus and proliferation of the virus in vitro and vivo
Antiviral research 2018 （IF 10.103）

3. Wan Li et al.
Anti-inflammatory effects of Morchella esculenta polysaccharide and its derivatives in fine particulate matter-treated NR8383 cells
International Journal of Biological Macromolecules 2019 （IF 8.200）

4. Pingli Li et al.
Preparation and in vitro immunomodulatory effect of curdlan sulfate
Carbohydrate Polymers 2014 （IF 11.200）

5. Guang Yu et al.
Ser9 phosphorylation causes cytoplasmic detention of I2PP2A/SET in Alzheimer disease
Neurobiology of Aging 2013 （IF 6.189）