2-8℃ 保存

1.有效期为试剂盒未拆封前按要求条件保存的有效期。
2.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

蛋白质谱,Pull-down, co-IP, WB,IP等

细胞/组织

1. 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

1. 离心机
2. 振荡器
3. 匀浆机/匀浆器
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. Western Blot实验内参可以选用Na-K ATPase。
6. 提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
7. 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
8. 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

产品使用方法最终以试剂盒里完整的纸质版为准！
以下仅供参考！

细胞蛋白提取
1. 提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A，充分混匀。
5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。
6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。
8. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。
9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。
10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴5-10分钟，37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体，保留下层。
11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。
12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。
13. 将上述蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。

组织蛋白提取
1. 提取液准备：
每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50mg-100mg适量组织样本，用冷PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加400μl冷的试剂 A，用组织匀浆机/器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡20-30分钟。
4. 按照细胞蛋白的提取方法的第5步骤往下操作即可。

1. 蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大细胞的上样量以提高膜蛋白浓度。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

1. Cuilian Yu, Kai Wei, et al.
Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide inhibits subgroup J avian leucosis virus infection by directly blocking virus infection and improving immunity
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）

2. Xiaoyun Lin, Shao Chen et al.
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein–Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
Cellular & Molecular Immunology 2016 （IF=8.213）

3. Ge Zhao, Siyuan Li, Wei Zhao, et al.
Phage Display against Corneal Epithelial Cells Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
PLoS ONE March 2012 | Volume 7 | Issue 3, （IF=4.411）

4. Lihong Liao, et al.
The Influence of Down-Regulation of Suppressor of Cellular Signaling Proteins by RNAi on Glucose Transport of Intrauterine Growth Retardation Rats
Pediatric Research 2011 Volume 69, Issue 6, pp 497-503 （IF=2.882）